產(chǎn)品貨號: IN0005
產(chǎn)品規(guī)格: 100ml/500ml
產(chǎn)品品牌:Invigentech
產(chǎn)品概述:
1.包裝規(guī)格
規(guī)格:100ml 、500ml
2.儲存條件
4℃避光保存1年;如果長期不用,可-20℃避光保存;可在4℃或室溫運輸。
產(chǎn)品描述:
本試劑以化學(xué)發(fā)光方法檢測蛋白質(zhì)或核酸類生物大分子。蛋白質(zhì)或核酸類生物大分子在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上,分別用一抗和辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標記的二抗順序結(jié)合膜上的目的蛋白;或以HRP標記的探針直接或間接結(jié)合膜上的目的核酸。洗膜后用新鮮配制的ECL工作液,在室溫下避光孵育膜2-3 min,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒,然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光時長可為數(shù)秒到數(shù)小時。顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上,也可不進行X光膠片曝光顯影步驟, 直接對印跡膜進行CCD掃描。
操作說明
1.使用合適的方法進行Western Blot實驗,直至用PBST或TBS/TBST洗滌二抗。
2.新鮮配制ECL工作液:ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液按1:1混合后即為ECL工作液。工作液混合后請盡快使用,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
3.用平頭鑷取出印跡膜,搭在濾紙上瀝干洗膜液但勿使膜*干燥。用ECL工作液均勻滴加至印跡膜上,確保*均勻覆蓋,室溫孵育2-3 min。ECL工作液使用量大約為0.125 ml/cm2膜或根據(jù)個人實驗習(xí)慣使用。
4.用平頭鑷夾住印跡膜,棄發(fā)光工作液,用吸水紙略吸去多余工作液。
5.快速將印跡膜置于二層保鮮膜之間,盡量趕盡氣泡。
6.將印跡膜蛋白面朝上,放于X光膠片暗盒內(nèi),用透明膠帶粘貼邊緣固定。
7.在暗室內(nèi)放入X光片,根據(jù)顯色情況曝光適當時間,顯影定影。
8.根據(jù)信號的強弱適當調(diào)整曝光及顯影時間,也可選擇不同時間多次曝光,以達更佳效果。
注意事項
1.ECL工作液配制過程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液時務(wù)必更換吸頭,工作液新鮮配制后應(yīng)立即使用,室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
2.Peroxide Solution B液含有氧化劑,易被還原而失效。各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。
3.ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物,因此檢測系統(tǒng)最終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。
4.盡量避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜,相互吸附或摩擦可能造成背景增加。
5.應(yīng)使用高質(zhì)量保鮮膜。質(zhì)量較差的保鮮膜可能會淬滅熒光或由于含有雜質(zhì)而污染印跡膜造成曝光背景值偏高。
6.根據(jù)目的蛋白豐度不同,曝光時間可能是數(shù)秒至數(shù)小時。曝光時間不足會導(dǎo)致目的條帶不明確,曝光時間過長會使背景加深。
7.(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP標記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。
8.由于發(fā)光液極其靈敏,推薦大多數(shù)進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000??贵w濃度過高可能造成高背景或沒有條帶。
9.ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
只能用于科學(xué)研究使用,禁止用于人、動物或者其它用途。
15021202164
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