瓊脂糖是用于什么樣的實驗你了解嗎？
更新時間：2020-03-18 點擊次數(shù)：830次
瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定 DNA、RNA 分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用 DNA 分子在電場中時的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達到分離混合物的目的。DNA 分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA 分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。DNA 分子的遷移速度與相對分子量成反比。
不同構(gòu)型的 DNA 分子的遷移速度不同。如環(huán)形 DNA 分子樣品，其中有三種構(gòu)型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、開環(huán)分子(ocDNA)、和線形 DNA 分子(IDNA)。這三種不同構(gòu)型分子進行電泳時的遷移速度大小順序為:cccDNA＞IDNA＞ocDNA。
核酸電泳通常使用瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠兩種介質(zhì)。瓊脂糖是一種聚合鏈線性分子；聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺（Acr）在 N,N,N′-四甲基乙二an（TEMED）和過硫酸胺（AP）的催化下聚合形成長鏈，并通過交聯(lián)劑 N,N′-亞甲雙丙烯酰胺（Bis）交叉連接而成。瓊脂糖凝膠適合分離200bp至近50kb的DNA片段，而聚丙烯酰胺凝膠對于小片段（5bp-500bp）的分離效果很好，且分辯力*。選擇不同濃度的凝膠，可以分離不同大小范圍的 DNA 分子。電場強度愈大，帶電顆粒的運動越快。但凝膠的有效分離范圍隨著電壓增大而減小，所以電泳時一般采用低電壓，不超過 6V/cm。而對于大片段電泳，可以選擇 0.5-1.0V/cm 電泳過夜。如果選擇高電壓電泳，可使用聚丙烯酰胺凝膠。
1. 凝膠強度：衡量瓊脂糖性能的關(guān)鍵參數(shù)，凝膠強度越高，凝膠性能越好，可以保證在低濃度下，凝膠性能依然很好，高凝膠強度瓊脂糖適合大分子核酸。
2. 低電滲（Low EEO）：電滲是一種物理現(xiàn)象，由于瓊脂糖這樣的多孔支持物在電場中會吸附水中的正負離子，而使溶液帶電向電極泳動，從而干擾核酸或蛋白電泳。
