一、簡介:
Exosome(外泌體)是具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)、直徑約為30-150nm、密度在1.13-1.21g/ml的膜性囊泡。在exosome的囊泡結(jié)構(gòu)中含有細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和小分子等物質(zhì),能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞以進(jìn)行細(xì)胞間通訊。研究發(fā)現(xiàn)exosome在眾多生理、病理過程中發(fā)揮著著重要作用。鑒于不同細(xì)胞分泌的exosome具有不用的組成成分和功能,故而exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,此外,基于exosome的膜性結(jié)構(gòu),亦可作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治療。Exosome的這些特性使其成為當(dāng)前的熱門研究對象。
Exosome在細(xì)胞中的蛋白質(zhì)含量極低,分離并獲取足量的exosome蛋白是進(jìn)行LC-MS分析的前提條件。SILAC結(jié)合LC-MS就能很好的進(jìn)行exosome蛋白的定量比較分析,體現(xiàn)在:(1)SILAC是體內(nèi)標(biāo)記,自然在exosome中的蛋白質(zhì)也是SILAC標(biāo)記的;(2)所需的蛋白量少,SILAC標(biāo)記的和未標(biāo)記的exosome蛋白各15-20μg足夠進(jìn)行MS鑒定與定量;(3)蛋白質(zhì)提取和后續(xù)操作步驟極為簡單方便,只需提取exosome蛋白、定量、1:1混合即可。(3)蛋白質(zhì)定量和分析軟件成熟(Maxquant和Perseus),結(jié)果分析方便直觀。
二、服務(wù)方案:
(一)整體服務(wù):
只需客戶提供細(xì)胞即可,我方負(fù)責(zé)完成:
SILAC培養(yǎng)基制備。
細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率MS檢測;
SILAC標(biāo)記細(xì)胞與非標(biāo)記細(xì)胞擴(kuò)增、exosome分離及exosome蛋白質(zhì)提取;
提取蛋白質(zhì)定量、1:1混合、SDS-PAGE分離及染色;
切割條帶,分別進(jìn)行LC-MS測試;
MS數(shù)據(jù)分析,完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析,篩選差異表達(dá)蛋白;
差異表達(dá)蛋白常規(guī)生物信息學(xué)分析;
(二)合作共贏方案:
原則是通過協(xié)商簽訂合同,雙方各完成一部分實驗內(nèi)容。
客戶方需從我方購買相應(yīng)的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細(xì)胞SILAC標(biāo)記的實驗方案,協(xié)助客戶完成細(xì)胞的SILAC標(biāo)記過程。
標(biāo)記完成后,需用LC-MS鑒定細(xì)胞標(biāo)記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。
終正式實驗的蛋白質(zhì)樣品,需交由我方完成MS鑒定和定量分析。
三、其他特色:
SILAC培養(yǎng)基。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基(K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等),7-10個工作日發(fā)貨,免去客戶從國外進(jìn)口SILAC培養(yǎng)基及其標(biāo)記氨基酸的漫長貨期。
SILAC培養(yǎng)基,500ml起訂。
我方同時銷售SILAC相關(guān)的試劑/耗材(dialyzed FBS,filter等),歡迎咨詢。
15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
一鍵分享網(wǎng)站到: